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A. सभी target sites का cut हो जाना/Cutting at all target sites
Explanation
Simple Explanation
Complete digestion में enzyme सभी recognition sites काटता है। Gel पर expected fragment pattern मिलता है। / In complete digestion the enzyme cuts all recognition sites. The expected fragment pattern appears on gel.
C. कम restriction enzyme या अपर्याप्त incubation time/Too little restriction enzyme or insufficient incubation time
Explanation
Simple Explanation
यदि restriction enzyme की मात्रा कम हो या incubation time पर्याप्त न हो, तो DNA के सभी recognition sites कट नहीं पाते। इसलिए कुछ DNA अणु पूर्ण रूप से कटते हैं, जबकि कुछ आंशिक रूप से कटते हैं; इसे partial digestion कहते हैं। DNA ligase DNA खंडों को जोड़ता है, काटता नहीं है। परीक्षा टिप: partial digestion के लिए enzyme की मात्रा, समय और उपयुक्त buffer conditions जाँचें। / If the amount of restriction enzyme is too low or the incubation time is insufficient, all recognition sites on the DNA may not be cut. As a result, some DNA molecules are cut completely while others are cut only at some sites, producing partial digestion. DNA ligase joins DNA fragments; it does not cut them. Exam tip: For partial digestion, check enzyme amount, incubation time, and suitable buffer conditions.
D. normal site के अलावा similar sites पर cutting/Cutting at similar sites besides the normal site
Explanation
Simple Explanation
Star activity में enzyme specificity घट सकती है। गलत buffer या excess enzyme इसका कारण बन सकते हैं। / In star activity enzyme specificity can decrease. Wrong buffer or excess enzyme can cause it.
A. recommended buffer और सही enzyme amount use करें/Use recommended buffer and correct enzyme amount
Explanation
Simple Explanation
Recommended conditions enzyme specificity बनाए रखती हैं। Excess enzyme और long incubation avoid करें। / Recommended conditions maintain enzyme specificity. Avoid excess enzyme and long incubation.
C. insert orientation control करने के लिए/To control insert orientation
Explanation
Simple Explanation
दो अलग ends insert को एक दिशा में ligate कराने में मदद कर सकते हैं। इससे wrong orientation कम होता है। / Two different ends can help ligate insert in one direction. This reduces wrong orientation.
D. दोनों enzymes की activity बनाए रखने के लिए/To maintain activity of both enzymes
Explanation
Simple Explanation
दो enzymes एक ही buffer में अलग-अलग efficiency दिखा सकते हैं। Compatible buffer digestion success के लिए जरूरी है। / Two enzymes can show different efficiencies in the same buffer. Compatible buffer is necessary for digestion success.
A. जब दो enzymes एक buffer में अच्छे से काम न करें/When two enzymes do not work well in one buffer
Explanation
Simple Explanation
Sequential digestion में enzymes अलग-अलग steps में use किए जाते हैं। यह buffer incompatibility में मदद करता है। / In sequential digestion enzymes are used in separate steps. It helps when buffers are incompatible.
A. अगर वे same या compatible overhang बनाएं/If they produce same or compatible overhangs
Explanation
Simple Explanation
कुछ enzymes अलग sites पहचानते हैं पर compatible overhangs देते हैं। ऐसे ends ligate हो सकते हैं। / Some enzymes recognize different sites but produce compatible overhangs. Such ends can ligate.
B. same recognition sequence पर अलग position में cut करने वाले enzymes/Enzymes cutting at different positions within the same recognition sequence
Explanation
Simple Explanation
Neoschizomers same site पहचान सकते हैं पर cut position अलग होती है। इससे ends अलग बन सकते हैं। / Neoschizomers can recognize the same site but cut at different positions. This can produce different ends.
C. डीएनए में प्रतिबंध एंजाइमों के कट-स्थलों की स्थिति का मानचित्र/Map showing the positions of restriction enzyme cut sites in DNA
Explanation
Simple Explanation
Restriction map किसी DNA अणु पर विभिन्न प्रतिबंध एंजाइमों के कट-स्थलों की स्थिति, क्रम और अक्सर उनके बीच की दूरी दर्शाता है। इसलिए विकल्प C सही है। यह जीनों के कार्य का मानचित्र नहीं होता; वह gene map या functional annotation से संबंधित होता है। परीक्षा टिप: restriction map को DNA के कटने वाले स्थानों का नक्शा याद रखें। / A restriction map shows the positions, order, and often the distances between restriction enzyme cut sites on a DNA molecule. Therefore, option C is correct. It does not show gene functions; that relates to gene mapping or functional annotation. Exam tip: remember a restriction map as a map of DNA cutting sites.
D. clone या insert सही है या नहीं जाँचना/Checking whether clone or insert is correct
Explanation
Simple Explanation
Diagnostic digestion expected bands से construct की पुष्टि करता है। यह cloning verification में common है। / Diagnostic digestion confirms a construct using expected bands. It is common in cloning verification.
A. construct सही हो सकता है/The construct may be correct
Explanation
Simple Explanation
Expected bands vector map के अनुसार correct insert का संकेत देते हैं। Final confirmation के लिए sequencing भी उपयोगी है। / Expected bands indicate the correct insert according to vector map. Sequencing is also useful for final confirmation.
B. wrong clone या incomplete digestion/Wrong clone or incomplete digestion
Explanation
Simple Explanation
Unexpected bands wrong construct partial digestion या star activity दिखा सकते हैं। Troubleshooting जरूरी है। / Unexpected bands can show wrong construct partial digestion or star activity. Troubleshooting is needed.
C. defined condition में DNA काटने की activity amount/Amount of activity to cut DNA under defined condition
Explanation
Simple Explanation
Enzyme units activity बताते हैं। Reaction setup में DNA amount के अनुसार enzyme मात्रा चुनी जाती है। / Enzyme units describe activity. Enzyme amount is chosen according to DNA amount in reaction setup.
D. star activity या glycerol effect/Star activity or glycerol effect
Explanation
Simple Explanation
Excess enzyme reaction conditions को बिगाड़ सकता है और star activity बढ़ा सकता है। Recommended amount use करें। / Excess enzyme can disturb reaction conditions and increase star activity. Use recommended amount.
A. enzyme stability और freezing protection के लिए/For enzyme stability and freezing protection
Explanation
Simple Explanation
Glycerol enzyme को freezing damage से बचाता है। लेकिन reaction में बहुत अधिक glycerol avoid किया जाता है। / Glycerol protects enzyme from freezing damage. But too much glycerol in reaction is avoided.
B. star activity बढ़ सकती है/Star activity can increase
Explanation
Simple Explanation
बहुत अधिक glycerol enzyme specificity को प्रभावित कर सकता है। इसलिए enzyme volume limited रखा जाता है। / Too much glycerol can affect enzyme specificity. Therefore enzyme volume is kept limited.
A. एंजाइम की गतिविधि कम हो सकती है/Enzyme activity can decrease
Explanation
Simple Explanation
Restriction enzyme एक प्रोटीन होता है। बार-बार जमाने और पिघलाने से उसकी संरचना अस्थिर हो सकती है, जिससे DNA को काटने की उसकी गतिविधि कम हो जाती है। DNA की मात्रा दोगुनी होना PCR जैसे प्रवर्धन से होता है, freeze-thaw से नहीं। परीक्षा टिप: restriction enzymes को सामान्यतः छोटे aliquots में रखकर बार-बार freeze-thaw से बचाया जाता है। / A restriction enzyme is a protein. Repeated freezing and thawing can destabilize its structure and reduce its ability to cut DNA. Doubling the amount of DNA occurs through amplification methods such as PCR, not through freeze-thaw cycles. Exam tip: restriction enzymes are commonly stored in small aliquots to avoid repeated freeze-thawing.
B. reaction conditions ready होने के बाद enzyme exposure control करने के लिए/To control enzyme exposure after reaction conditions are ready
Explanation
Simple Explanation
Enzyme last में add करने से reaction conditions पहले correct हो जाती हैं। यह activity और timing control में मदद करता है। / Adding enzyme last ensures reaction conditions are correct first. It helps control activity and timing.
C. अनचाहे DNA degradation से बचने के लिए/To prevent unwanted DNA degradation
Explanation
Simple Explanation
Nuclease-free water में DNase जैसे contaminating nucleases नहीं होते। ये nucleases DNA को अनचाहे स्थानों पर काटकर या degrade करके restriction digestion के परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं। इसलिए DNA को सुरक्षित रखने के लिए विकल्प C सही है। Restriction enzyme स्वयं DNA को केवल अपने specific recognition site पर काटता है; पानी का कार्य DNA को काटना नहीं है। परीक्षा टिप: DNA से जुड़ी reaction में nuclease-free reagents का उपयोग contamination रोकने के लिए किया जाता है। / Nuclease-free water does not contain contaminating nucleases such as DNases. Such enzymes can cut or degrade DNA at unwanted sites and interfere with the restriction digestion result. Therefore, option C is correct because it protects DNA from unwanted degradation. The restriction enzyme itself cuts DNA only at its specific recognition site; water is not used to cut DNA. Exam tip: Use nuclease-free reagents in DNA-based reactions to prevent contamination and DNA damage.
D. Contamination और nuclease के प्रवेश को रोकने के लिए/To prevent contamination and nuclease entry
Explanation
Simple Explanation
Clean, sterile pipette tips नमूने में दूसरे DNA, सूक्ष्मजीवों या DNase जैसे nucleases के प्रवेश को रोकते हैं। Nucleases DNA को काट या नष्ट कर सकते हैं और restriction digestion के परिणाम गलत हो सकते हैं। Agarose gel अलग चरण में DNA fragments को अलग करने के लिए बनाया जाता है, इसलिए विकल्प B सही कारण नहीं है। परीक्षा टिप: DNA और restriction enzyme के साथ काम करते समय हमेशा sterile, preferably filter tips का उपयोग याद रखें। / Clean, sterile pipette tips prevent the entry of foreign DNA, microorganisms, or nucleases such as DNase into the sample. Nucleases can cut or degrade DNA and may give incorrect restriction digestion results. Agarose gel is prepared in a separate step to separate DNA fragments, so option B is not the reason. Exam tip: When handling DNA and restriction enzymes, remember to use sterile, preferably filter, tips.
A. ethanol enzyme reaction inhibit कर सकता है/Ethanol can inhibit enzyme reaction
Explanation
Simple Explanation
Residual ethanol restriction enzyme activity घटा सकता है। DNA pellet को सही तरह dry करना चाहिए। / Residual ethanol can reduce restriction enzyme activity. The DNA pellet should be dried properly.
A. enzyme activity को inhibit कर सकता है/It can inhibit enzyme activity
Explanation
Simple Explanation
Phenol जैसे contaminants enzyme reactions को रोक सकते हैं। इसलिए DNA cleanup important है। / Contaminants like phenol can inhibit enzyme reactions. Therefore DNA cleanup is important.
A. methylation enzyme recognition रोक सकती है/Methylation can block enzyme recognition
Explanation
Simple Explanation
कुछ enzymes methylated recognition sites नहीं काटते। Methylation sensitivity enzyme choice में देखनी चाहिए। / Some enzymes do not cut methylated recognition sites. Methylation sensitivity should be checked in enzyme choice.
A. methylated site पर cutting बदल सकती है/Its cutting can change at methylated site
Explanation
Simple Explanation
Methylation-sensitive enzymes methylated DNA को कम या नहीं काट सकते। यह digestion pattern बदल सकता है। / Methylation-sensitive enzymes may cut methylated DNA poorly or not at all. This can change digestion pattern.
A. वह DNA जिसे enzyme काटेगा/The DNA that enzyme will cut
Explanation
Simple Explanation
Substrate DNA reaction में cutting target होता है। Enzyme recognition site इसी DNA पर खोजता है। / Substrate DNA is the cutting target in the reaction. The enzyme looks for recognition site on this DNA.
A. उनकी shape और cut site arrangement अलग होती है/Their shape and cut site arrangement differ
Explanation
Simple Explanation
Circular DNA एक cut से linear हो सकता है जबकि linear DNA में fragment count अलग हो सकता है। Shape pattern को प्रभावित करती है। / Circular DNA can become linear with one cut while linear DNA can show different fragment counts. Shape affects pattern.
A. supercoiled shape migration बदलती है/Supercoiled shape changes migration
Explanation
Simple Explanation
Plasmid conformation gel mobility को प्रभावित करती है। इसलिए uncut plasmid के bands अलग दिख सकते हैं। / Plasmid conformation affects gel mobility. Therefore uncut plasmid bands can look different.
A. circular vector को काटकर linear बनाना/Cutting circular vector to make it linear
Explanation
Simple Explanation
Linearized vector insert ligation के लिए तैयार हो सकता है। सही site पर cut होना जरूरी है। / A linearized vector can be ready for insert ligation. Cutting at the correct site is necessary.
Alkaline phosphatase vector ends से phosphate हटाकर self-ligation घटा सकता है। यह cloning efficiency में मदद करता है। / Alkaline phosphatase removes phosphate from vector ends and can reduce self-ligation. This helps cloning efficiency.
A. insert को बाकी DNA और enzyme से अलग करने के लिए/To separate insert from other DNA and enzyme
Explanation
Simple Explanation
Purification desired insert को साफ करती है। इससे ligation और cloning result बेहतर हो सकते हैं। / Purification cleans the desired insert. This can improve ligation and cloning results.
A. डीएनए में क्षति या थाइमिन डाइमर बन सकते हैं/DNA can be damaged or thymine dimers may form
Explanation
Simple Explanation
UV प्रकाश डीएनए के बेसों को नुकसान पहुँचा सकता है और थाइमिन डाइमर जैसे फोटो-उत्पाद बना सकता है। इससे डीएनए की PCR, ligation या transformation जैसी आगे की प्रक्रियाओं में दक्षता घट सकती है। विकल्प B गलत है क्योंकि UV से शुद्धता नहीं बढ़ती; यह डीएनए की गुणवत्ता को नुकसान पहुँचा सकता है। परीक्षा टिप: gel extraction में DNA band को कम समय तक UV पर देखकर जल्दी काटते हैं; संभव हो तो blue-light transilluminator उपयोगी होता है। / UV light can damage DNA bases and may form photoproducts such as thymine dimers. This can reduce the efficiency of downstream procedures such as PCR, ligation, or transformation. Option B is incorrect because UV exposure does not improve DNA purity; it can reduce DNA quality. Exam tip: during gel extraction, visualize the DNA band for the shortest possible time under UV light and excise it quickly; a blue-light transilluminator is preferable when available.
A. ligation या PCR से पहले inhibitors हटाने के लिए/To remove inhibitors before ligation or PCR
Explanation
Simple Explanation
Cleanup enzyme buffer salts और छोटे fragments हटाने में मदद कर सकता है। इससे next step efficient हो सकता है। / Cleanup can remove enzyme buffer salts and small fragments. This can make the next step efficient.
B. बिना restriction enzyme के डीएनए/DNA without restriction enzyme
Explanation
Simple Explanation
Negative control में वही DNA रखा जाता है, लेकिन restriction enzyme नहीं मिलाया जाता। इसलिए DNA कटता नहीं है और gel पर uncut DNA का band pattern मिलता है। इस pattern की तुलना enzyme-treated sample से करके पता चलता है कि bands में परिवर्तन वास्तव में restriction digestion के कारण हुआ है। केवल enzyme और buffer, पर DNA न होना, contamination जाँचने के लिए उपयोगी हो सकता है, लेकिन uncut DNA control नहीं है। परीक्षा टिप: restriction digestion का negative control सामान्यतः “DNA बिना enzyme” होता है। / In a negative control, the same DNA is kept without adding the restriction enzyme. Therefore, the DNA remains uncut and gives the band pattern of uncut DNA on the gel. Comparing this pattern with the enzyme-treated sample shows whether the change in bands is due to restriction digestion. A tube containing only enzyme and buffer but no DNA may help check contamination, but it is not the uncut-DNA control. Exam tip: the usual negative control for restriction digestion is “DNA without enzyme.”
A. enzyme काम कर रहा है या नहीं देखने के लिए/To check whether enzyme is working
Explanation
Simple Explanation
Known DNA substrate पर expected cut enzyme activity verify करता है। यह troubleshooting में useful है। / Expected cutting on a known DNA substrate verifies enzyme activity. This is useful in troubleshooting.
A. enzyme buffer या condition problem/Enzyme buffer or condition problem
Explanation
Simple Explanation
Positive control failure enzyme या reaction condition में problem दिखाता है। Buffer temperature और enzyme storage check करें। / Positive control failure indicates a problem with enzyme or reaction condition. Check buffer temperature and enzyme storage.
A. test DNA में site absent या methylated हो सकती है/Test DNA may lack site or be methylated
Explanation
Simple Explanation
Positive control enzyme activity दिखाता है। Test DNA में recognition site या methylation issue हो सकता है। / Positive control shows enzyme activity. Test DNA may have recognition site or methylation issue.
A. activity और expected digestion/Activity and expected digestion
Explanation
Simple Explanation
New batch की performance verify करना reliable results के लिए अच्छा practice है। Control digest उपयोगी है। / Verifying performance of a new batch is good practice for reliable results. Control digest is useful.
A. एंजाइम की गतिविधि घट सकती है/Enzyme activity can decrease
Explanation
Simple Explanation
Restriction enzyme एक निश्चित pH सीमा में सबसे प्रभावी ढंग से कार्य करता है। गलत pH एंजाइम की संरचना या उसके सक्रिय स्थल को प्रभावित कर सकता है, जिससे DNA का कटना कम हो जाता है या रुक सकता है। DNA की शुद्धता pH गलत होने से हमेशा नहीं बढ़ती। परीक्षा टिप: restriction digestion के लिए दिए गए buffer का सही pH और तापमान याद रखें। / A restriction enzyme works most effectively within a specific pH range. An incorrect pH can affect the enzyme's structure or active site, reducing or even preventing DNA cleavage. Incorrect pH does not automatically increase DNA purity. Exam tip: remember that the recommended buffer provides the correct pH and conditions for restriction digestion.
A. यह एंजाइम की DNA से binding, activity और specificity को प्रभावित कर सकता है/It can affect the enzyme's binding to DNA, activity, and specificity
Explanation
Simple Explanation
Salt concentration restriction enzyme और DNA के बीच ionic interactions को प्रभावित करती है। बहुत कम या बहुत अधिक salt होने पर एंजाइम की activity घट सकती है और कुछ स्थितियों में वह अपने recognition site के अतिरिक्त स्थानों पर भी कट लगा सकता है (star activity)। इसलिए निर्माता द्वारा सुझाया गया buffer उपयोग करना चाहिए। परीक्षा टिप: restriction enzyme के लिए सही buffer में salt, pH और Mg²⁺ जैसे आवश्यक घटक होते हैं। / Salt concentration affects the ionic interactions between a restriction enzyme and DNA. Too little or too much salt can reduce enzyme activity and, under some conditions, may cause cutting at sites other than the recognition sequence (star activity). Therefore, the manufacturer-recommended buffer should be used. Exam tip: a proper restriction-enzyme buffer provides suitable salt, pH, and essential components such as Mg²⁺.
A. एंजाइम की सक्रियता और स्थिरता बनाए रखने के लिए/To preserve enzyme activity and stability
Explanation
Simple Explanation
Restriction enzyme प्रोटीन होते हैं और अधिक तापमान पर उनकी संरचना बदल सकती है या उनकी सक्रियता कम हो सकती है। इन्हें बर्फ पर रखने से कटाई की अभिक्रिया शुरू करने तक एंजाइम स्थिर और सक्रिय रहता है। डीएनए का amplification PCR से किया जाता है, restriction enzyme से नहीं। परीक्षा टिप: DNA को काटने वाले एंजाइमों को सामान्यतः ठंडा रखा जाता है। / Restriction enzymes are proteins whose structure or activity may be reduced at higher temperatures. Keeping them on ice helps maintain enzyme stability and activity until the digestion reaction is started. DNA amplification is done by PCR, not by a restriction enzyme. Exam tip: Enzymes used for cutting DNA are generally kept cold during setup.
A. DNA और enzyme evenly mix करने के लिए without shearing/To mix DNA and enzyme evenly without shearing
Explanation
Simple Explanation
Gentle mixing reaction components मिलाता है और DNA damage से बचाता है। Harsh vortexing avoid करें। / Gentle mixing combines reaction components and avoids DNA damage. Avoid harsh vortexing.
A. DNA ligase तभी efficient joining कर पाएगा/DNA ligase can then join efficiently
Explanation
Simple Explanation
Compatible ends base pairing और ligation को आसान बनाते हैं। Incompatible ends cloning failure दे सकते हैं। / Compatible ends make base pairing and ligation easier. Incompatible ends can cause cloning failure.
A. अनुपयुक्त agarose gel percentage या गलत DNA ladder के उपयोग के कारण/Due to an unsuitable agarose gel percentage or an incorrect DNA ladder
Explanation
Simple Explanation
DNA fragment का आकार agarose gel electrophoresis में उसकी migration को DNA ladder के ज्ञात bands से तुलना करके अनुमानित किया जाता है। यदि gel percentage fragment range के लिए उपयुक्त न हो या गलत size range की DNA ladder ली जाए, तो bands का separation और size estimate गलत हो सकता है। Restriction enzyme का रंग या पानी का स्वाद migration को प्रभावित नहीं करते। परीक्षा टिप: छोटे fragments के लिए अधिक agarose percentage और बड़े fragments के लिए कम percentage gel अधिक उपयुक्त होता है। / DNA fragment size is estimated in agarose gel electrophoresis by comparing its migration with bands of known size in a DNA ladder. An unsuitable gel percentage or a ladder with an inappropriate size range can give poor separation and an incorrect size estimate. The colour of a restriction enzyme and the taste of water do not affect DNA migration. Exam tip: use a higher agarose percentage for smaller fragments and a lower percentage for larger fragments.
A. better resolution पाने के लिए/To obtain better resolution
Explanation
Simple Explanation
छोटे fragments अलग करने के लिए higher agarose percentage बेहतर resolution दे सकती है। Size range के अनुसार gel चुनें। / Higher agarose percentage can give better resolution for small fragments. Choose gel according to size range.
A. complete digestion partial digestion star activity और controls याद रखें/Remember complete digestion partial digestion star activity and controls
Explanation
Simple Explanation
Restriction digestion में correct conditions और controls result को reliable बनाते हैं। Unexpected bands troubleshooting मांगते हैं। / In restriction digestion correct conditions and controls make results reliable. Unexpected bands need troubleshooting.
A. restriction digestion में enzyme condition DNA purity और band pattern महत्वपूर्ण हैं/In restriction digestion enzyme condition DNA purity and band pattern are important
Explanation
Simple Explanation
Good digestion सही enzyme buffer temperature और clean DNA पर निर्भर है। Controls और gel check जरूरी हैं। / Good digestion depends on correct enzyme buffer temperature and clean DNA. Controls and gel check are necessary.