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In this Class 11 Biotechnology topic, students learn how a desired DNA fragment is inserted into a suitable cloning vector during recombinant DNA technology. The topic explains the role of restriction enzymes in creating compatible ends, selection of an appropriate insertion site, and DNA ligase in joining the fragment with the vector to form recombinant DNA. It also introduces how insertion can affect a marker gene and why transformed cells are later identified through selection and screening.
Medium · Level 1 · 2 questions
TOPIC PRACTICE
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lacZ can become inactive
lacZ will always be more active
DNA will burn
The host becomes water
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The chance of the insert joining in the correct orientation increases
DNA becomes protein
The enzyme is destroyed
The gel becomes useless
Question 1MediumLevel 1
What can happen when an insert enters the lacZ gene in blue-white screening?Blue-white screening में lacZ gene में insert आने पर क्या हो सकता है?
Correct answer:सही उत्तर:A
In blue-white screening, the cloning site is commonly positioned within the lacZ coding region of a suitable plasmid. If a foreign DNA insert is ligated into that site, it can interrupt lacZ, a process called insertional inactivation. In bacteria supplied with the appropriate substrate, cells with an intact lacZ function generally form blue colonies, whereas cells in which the gene is disrupted by an insert generally form white colonies. Thus option A is correct. The result is not an absolutely universal statement about every system because expression conditions and host genotype matter, but disruption of lacZ is the intended screening principle. The other options describe no biological consequence of insertion.Blue-white screening में cloning site को प्रायः plasmid के lacZ coding region के भीतर रखा जाता है। जब foreign DNA insert उस स्थान पर जुड़ता है, तो lacZ gene का क्रम बाधित हो सकता है; इसे insertional inactivation कहते हैं। उपयुक्त substrate और host परिस्थितियों में intact lacZ वाली कोशिकाएँ सामान्यतः blue colonies बनाती हैं, जबकि insert के कारण lacZ बाधित होने वाली recombinant कोशिकाएँ सामान्यतः white colonies बनाती हैं। इसलिए विकल्प A सही है। यह screening प्रणाली की सामान्य व्याख्या है, यद्यपि वास्तविक रंग host genotype और प्रयोग की परिस्थितियों पर भी निर्भर कर सकता है। DNA जलना, host का पानी बनना या lacZ का हमेशा अधिक active होना इस प्रक्रिया के परिणाम नहीं हैं।
What is the best outcome of directional cloning?Directional cloning का सबसे अच्छा परिणाम क्या होता है?
Correct answer:सही उत्तर:A
Directional cloning uses two different, incompatible ends on the vector and insert. Each end can pair only with its complementary partner, so the insert is strongly guided into one orientation rather than being able to enter randomly in either direction. This is especially useful when a gene must be expressed from a promoter in the correct 5′-to-3′ direction. It does not guarantee that every colony is correct, because incomplete digestion, recombination, or technical errors can still occur; verification by colony PCR, restriction analysis, or sequencing remains important. Option A is therefore the best outcome. DNA does not become protein during cloning, enzymes are not the intended product, and the gel remains a useful analytical tool.Directional cloning में vector और insert के दो सिरों को अलग-अलग restriction enzymes से काटकर अलग प्रकार के, परस्पर पूरक ends बनाए जाते हैं। प्रत्येक end केवल अपने उपयुक्त complementary end से जुड़ता है, इसलिए insert के random दिशा में लगने की संभावना बहुत कम हो जाती है और वह अपेक्षित orientation में जुड़ता है। यदि gene को promoter से सही 5′ से 3′ दिशा में व्यक्त करना हो, तो यह विशेष रूप से उपयोगी है। फिर भी हर colony के सही होने की गारंटी नहीं होती; incomplete digestion या अन्य तकनीकी त्रुटियाँ संभव हैं, इसलिए colony PCR, restriction analysis या sequencing से जाँच आवश्यक रहती है। अतः विकल्प A सही है।
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