If a fragment is very small in restriction digest, what issue can occur in ligation?यदि restriction digest में कोई DNA fragment बहुत छोटा हो, तो ligation में कौन-सी समस्या आ सकती है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: Recovery and quantification can be difficultRecovery and quantification can be difficult
The governing concept is that DNA fragments must first be recovered and measured accurately before ligation. A very small fragment may migrate close to the dye front or diffuse during electrophoresis, making its band difficult to see. During gel extraction, it can also be lost through inefficient binding, transfer, or elution. Because the recovered amount is uncertain, the insert-to-vector molar ratio cannot be set reliably; too little insert may reduce recombinant formation, whereas excess insert may promote unwanted products. Therefore option A is correct. A small fragment does not become a protein, enzymes do not simply vanish, and the vector is not necessarily absent. Careful gel conditions, sensitive visualization, and quantitative measurement help reduce the problem.मुख्य अवधारणा यह है कि ligation से पहले DNA fragment को gel से सही ढंग से निकालना और उसकी मात्रा मापना आवश्यक होता है। बहुत छोटा fragment gel में dye front के पास जा सकता है या फैल सकता है, इसलिए उसका band स्पष्ट दिखाई नहीं देता। Gel extraction के समय वह membrane से कम जुड़ने, transfer के दौरान या elution में खो भी सकता है। मात्रा ठीक से ज्ञात न होने पर insert और vector का molar ratio सही नहीं बनाया जा सकता। बहुत कम insert से recombinant molecule कम बनेंगे, जबकि बहुत अधिक insert से अवांछित products बन सकते हैं। इसलिए विकल्प A सही है। छोटा fragment protein नहीं बनता, enzyme अपने-आप गायब नहीं होता और vector का अनुपस्थित होना आवश्यक नहीं है।
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