When can destruction of a restriction site be useful in cloning verification?Cloning verification में restriction site का नष्ट होना कब उपयोगी हो सकता है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: When the original site no longer cuts after ligationजब ligation के बाद original site पर दोबारा cut न हो
The governing concept is diagnostic restriction analysis of a recombinant junction. When an insert and vector are joined, the two DNA ends may create a new sequence that no longer contains the original restriction-enzyme recognition site. A diagnostic digest can exploit this change: the expected clone is cut differently from an unligated or empty vector, producing a distinguishable band pattern on a gel. Comparing the observed pattern with predicted fragment sizes can therefore support confirmation of the desired construct. The useful event is not DNA absence, protein formation, or lack of a ladder; it is loss of the original cutting site after ligation.यहाँ मुख्य सिद्धांत recombinant junction का diagnostic restriction analysis है। Insert और vector जुड़ने पर दोनों DNA ends से बनी नई sequence में original restriction enzyme recognition site समाप्त हो सकती है। तब diagnostic digest में सही recombinant clone, unligated DNA या empty vector से अलग pattern देता है। Gel पर प्राप्त bands को अपेक्षित fragment sizes से मिलाकर construct की पहचान की जा सकती है। इसलिए site का नष्ट होना verification में एक उपयोगी marker बन सकता है। इसका संबंध DNA के अनुपस्थित होने, protein बनने या ladder न होने से नहीं है। सही विकल्प वह है जिसमें ligation के बाद पुराने site पर enzyme दोबारा cut नहीं करता।
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