Why is it important to keep enzyme volume low but activity sufficient in restriction digestion setup?Restriction digestion setup में enzyme volume कम लेकिन activity sufficient रखना क्यों जरूरी है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: To get complete digestion while keeping glycerol lowglycerol कम रखते हुए complete digestion पाने के लिए
Restriction digestion requires enough enzyme units to cleave all accessible recognition sites in the DNA, but adding a large volume of enzyme stock is not automatically better. Commercial enzyme preparations commonly contain glycerol and storage salts. Excessive carryover of glycerol, especially beyond the recommended final concentration, can promote nonspecific or star activity and may disturb the reaction conditions. Therefore the reaction is planned with a sufficient number of enzyme units in the smallest practical volume, while keeping the correct buffer, temperature, time, and DNA amount. This balances complete digestion with specificity. The purpose is not to make DNA into protein, dry the gel, or freeze the sample, so A is correct.Restriction digestion में DNA के सभी accessible recognition sites काटने के लिए पर्याप्त enzyme units आवश्यक होते हैं, लेकिन enzyme stock का बहुत अधिक volume डालना लाभकारी नहीं होता। Commercial enzyme preparations में प्रायः glycerol और storage salts होते हैं। यदि glycerol की final concentration recommended सीमा से अधिक हो जाए, तो nonspecific या star activity बढ़ सकती है और reaction conditions बिगड़ सकती हैं। इसलिए reaction इस तरह बनाई जाती है कि कम से कम practical volume में पर्याप्त enzyme units मिलें तथा buffer, temperature, time और DNA amount उचित रहें। इससे complete digestion और specificity के बीच संतुलन बनता है। इसका उद्देश्य DNA को protein बनाना, gel सुखाना या sample freeze करना नहीं है। इसलिए A सही है।
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