When can DNA stored in TE buffer interfere with a restriction-digestion reaction?TE buffer में रखा गया DNA restriction-digestion reaction में कब बाधा डाल सकता है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: When the EDTA carried into the reaction is present at too high a concentrationWhen the EDTA carried into the reaction is present at too high a concentration
TE buffer contains Tris, which helps maintain pH, and EDTA, which binds divalent metal ions such as Mg2+. Many restriction enzymes require Mg2+ as a cofactor for phosphodiester-bond cleavage. If too much TE is added, the accompanying EDTA can chelate enough magnesium to reduce enzyme activity or prevent digestion. Thus option A is correct. The practical response may be to limit the volume of TE carried into the reaction, dilute the DNA appropriately, exchange the buffer, or purify the sample according to the enzyme protocol. Options B, C, and D do not affect the chemical availability of magnesium and therefore do not explain failed digestion.TE buffer में Tris और EDTA होते हैं। Tris pH को स्थिर रखने में मदद करता है, जबकि EDTA Mg2+ जैसे divalent metal ions को बांध लेता है। अनेक restriction enzymes को DNA की phosphodiester bonds काटने के लिए Mg2+ सह-कारक के रूप में चाहिए। यदि DNA के साथ बहुत अधिक TE reaction में चला जाए, तो EDTA उपलब्ध magnesium को chelate करके enzyme की activity घटा सकता है या digestion रोक सकता है। इसलिए option A सही है। इससे बचने के लिए TE की मात्रा सीमित रखी जा सकती है, DNA को उचित रूप से dilute किया जा सकता है या sample को उपयुक्त buffer में बदला अथवा purify किया जा सकता है। B, C और D का magnesium availability से संबंध नहीं है।
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