What is the risk if a gel run is too long in restriction digestion?Restriction digestion में gel run बहुत लंबा हो तो क्या risk है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: Small fragments can run out of gelsmall fragments gel से निकल सकते हैं
The governing concept is size-dependent migration during agarose gel electrophoresis. DNA molecules move through the gel toward the positive electrode, and smaller fragments generally migrate faster than larger fragments. If electrophoresis continues too long, a small restriction fragment may travel beyond the lower edge of the gel and diffuse into the running buffer, making it difficult or impossible to visualize or recover. Therefore option A is correct. Run time should be selected according to gel percentage, voltage, dye-front position, and the size range being examined. A long run does not strengthen the enzyme, guarantee DNA purity, or transform buffer into DNA.इसका मुख्य सिद्धांत agarose gel में DNA की size-dependent migration है। DNA विद्युत क्षेत्र में positive electrode की ओर चलता है और छोटे fragments सामान्यतः बड़े fragments की तुलना में तेज़ी से आगे बढ़ते हैं। यदि electrophoresis बहुत देर तक जारी रहे, तो छोटा restriction fragment gel के निचले किनारे से बाहर निकलकर running buffer में फैल सकता है। तब वह दिखाई नहीं देगा या उसे recover करना कठिन होगा। इसलिए विकल्प A सही है। Run time gel की percentage, voltage, dye front और अपेक्षित fragment-size range देखकर तय करना चाहिए। लंबा run enzyme को अधिक शक्तिशाली नहीं बनाता, DNA की purity निश्चित नहीं करता और buffer को DNA में नहीं बदलता।
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