What should be considered when using DNA stored in TE buffer for digestion?TE buffer में stored DNA को digestion में उपयोग करते समय किस बात का ध्यान रखना चाहिए?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: The EDTA concentration can affect the enzyme reactionEDTA की concentration enzyme reaction को प्रभावित कर सकती है
The governing concept is compatibility between the DNA storage buffer and restriction-enzyme requirements. TE buffer commonly contains Tris to maintain pH and EDTA to bind divalent metal ions such as magnesium. Restriction enzymes generally require magnesium as a cofactor, so excessive EDTA can chelate available magnesium and reduce or inhibit cleavage. The amount of TE carried into the reaction should therefore be considered, especially when the DNA solution is added in a large volume. TE does not automatically destroy DNA, Tris does not produce protein, and water is not absent from a properly prepared reaction. Checking buffer compatibility helps preserve reliable digestion.इसका मुख्य सिद्धांत DNA storage buffer और restriction-enzyme reaction की compatibility है। TE buffer में सामान्यतः pH बनाए रखने के लिए Tris और divalent metal ions, विशेषकर magnesium, को bind करने के लिए EDTA होता है। Restriction enzymes को cleavage के लिए magnesium cofactor की आवश्यकता होती है। इसलिए अधिक EDTA उपलब्ध magnesium को chelate करके digestion को कम या पूरी तरह inhibit कर सकता है। Reaction में DNA solution के साथ कितना TE जा रहा है, यह विशेष रूप से तब देखना चाहिए जब DNA का volume बड़ा हो। TE अपने-आप DNA को नष्ट नहीं करता, Tris protein नहीं बनाता और सही reaction में पानी अनुपस्थित नहीं होता। Buffer compatibility जाँचने से digestion विश्वसनीय रहता है।
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