Why does increasing incubation time not always help in restriction digestion?Restriction digestion में incubation time बढ़ाने से हमेशा फायदा क्यों नहीं होता?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: Very long incubation can cause non-specific DNA cleavage (star activity)बहुत लंबे incubation से गैर-विशिष्ट DNA कट लग सकते हैं (star activity)
A is correct. Restriction digestion is usually completed within the recommended incubation time. Excessively long incubation, especially under non-optimal conditions, may allow the enzyme to cut DNA at sequences similar to its normal recognition site. This non-specific cleavage is called star activity and can produce unwanted DNA fragments. Extra time does not increase enzyme concentration, convert sticky ends into blunt ends, or purify DNA. Exam tip: For digestion, follow the prescribed enzyme, buffer, temperature, and incubation time together.सही उत्तर A है। Restriction digestion सामान्यतः अनुशंसित समय में पूरा हो जाता है। बहुत लंबे समय तक incubation करने पर, विशेषकर गैर-आदर्श परिस्थितियों में, enzyme अपने सामान्य recognition site के अलावा अन्य समान sites पर भी कट लगा सकता है; इसे star activity कहते हैं। इससे DNA के अनचाहे fragments बन सकते हैं। केवल समय बढ़ाने से enzyme की सांद्रता नहीं बढ़ती, sticky ends blunt ends में नहीं बदलते और DNA शुद्ध भी नहीं होता। परीक्षा टिप: digestion के लिए enzyme, buffer, तापमान और incubation time—चारों को protocol के अनुसार रखें।
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