Why are DNA ends purified before ligation after restriction digestion?Restriction digestion के बाद ligation से पहले DNA ends को शुद्ध क्यों किया जाता है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: To remove enzyme, buffer, and very small unwanted fragmentsenzyme, buffer और बहुत छोटे अवांछित fragments हटाने के लिए
Purification before ligation cleans the DNA preparation after restriction digestion. The reaction mixture may contain restriction enzyme, salts, buffer components, glycerol, and very small unwanted DNA fragments. Some of these substances can inhibit DNA ligase, interfere with the required reaction conditions, or increase unwanted joining between fragments. Removing them leaves compatible vector and insert ends in a cleaner solution, improving the probability of productive recombinant-DNA formation. Thus, option A is correct. Purification does not destroy the desired DNA, so B is wrong. It does not add protein, eliminating C, and ethanol production has no role in this molecular-cloning step, eliminating D. The exact cleanup method may be a column, precipitation, or gel extraction depending on the experiment.Restriction digestion के बाद purification का उद्देश्य DNA नमूने को साफ करना है। Reaction mixture में restriction enzyme, salts, buffer के घटक, glycerol तथा बहुत छोटे अवांछित DNA fragments बचे हो सकते हैं। इनमें से कुछ पदार्थ DNA ligase की क्रिया को रोक सकते हैं, आवश्यक reaction conditions को बदल सकते हैं या अवांछित fragments को आपस में जोड़ने की संभावना बढ़ा सकते हैं। इन्हें हटाने पर vector और insert के compatible ends अधिक स्वच्छ माध्यम में मिलते हैं और recombinant DNA बनने की संभावना बढ़ती है। इसलिए विकल्प A सही है। Purification उपयोगी DNA को नष्ट करने के लिए नहीं होती, इसलिए B गलत है। इसका उद्देश्य protein जोड़ना नहीं है, इसलिए C गलत है। Ethanol बनाना इस cloning प्रक्रिया से संबंधित नहीं है, इसलिए D भी गलत है। प्रयोग के अनुसार column purification, precipitation या gel extraction अपनाई जा सकती है।
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