Very small extra bands in a restriction fragment pattern can be linked with what?Restriction fragment pattern में बहुत छोटे अतिरिक्त bands किससे जुड़े हो सकते हैं?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: Extra cut sites or star activityExtra cut sites or star activity
The governing concept is that an unexpected small band may reflect an additional DNA cleavage product rather than a ligation or expression event. It can arise from an extra restriction site present in the DNA sequence, or from star activity, in which a restriction enzyme cuts sequences similar to but not identical with its normal recognition site under unsuitable conditions. Excess enzyme, incorrect buffer, high glycerol concentration, prolonged incubation, or unsuitable pH can increase this nonspecific cleavage. Option D is correct. DNA ligase, cell culture, and protein synthesis do not directly create extra restriction fragments in the digestion lane. Appropriate controls, a corrected buffer, shorter incubation, and sequencing or mapping can help determine whether the band is genuine or an artefact.मुख्य अवधारणा यह है कि restriction pattern में अचानक दिखाई देने वाला बहुत छोटा band किसी अतिरिक्त DNA cleavage product का संकेत हो सकता है। इसका कारण DNA sequence में मौजूद कोई अतिरिक्त restriction site हो सकता है, या star activity हो सकती है। Star activity में enzyme अपनी सामान्य recognition sequence से मिलती-जुलती, लेकिन बिल्कुल समान नहीं, sequence को भी काटने लगता है। बहुत अधिक enzyme, गलत buffer, अधिक glycerol, बहुत लंबी incubation या अनुपयुक्त pH ऐसी nonspecific cutting बढ़ा सकते हैं। इसलिए विकल्प D सही है। DNA ligase, cell culture और protein synthesis सीधे digestion lane में extra restriction fragments नहीं बनाते। Controls, उचित buffer, कम incubation और आवश्यक होने पर sequencing से कारण की पुष्टि की जा सकती है।
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