Which option can reduce the insert orientation problem?कौन सा option insert orientation problem को कम कर सकता है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: Using two different restriction enzymestwo different restriction enzymes use करना
The direct answer is option A: using two different restriction enzymes can reduce the insert-orientation problem. If the same enzyme cuts both ends, the insert may sometimes join in either direction because both ends are compatible. Two different enzymes create two different, non-equivalent ends. The insert can then fit into the vector in only one planned orientation, a method called directional cloning, provided the insert and vector are designed with the matching sites. Option A is correct. Option B is wrong because boiling can denature the enzyme and damage the cloning reaction. Option C is wrong because removing DNA prevents construction rather than controlling orientation. Option D is wrong because ligase is needed to seal the joined DNA; avoiding it prevents stable recombinant formation. This method does not guarantee success in every experiment, but it strongly helps when the design is correct. Memory cue: two different cuts give one planned direction.सीधा उत्तर विकल्प A है: दो अलग restriction enzymes का उपयोग insert orientation की समस्या कम कर सकता है। यदि दोनों सिरों पर वही enzyme लगाया जाए, तो insert के दोनों ends समान प्रकार के हो सकते हैं और वह vector में दो दिशाओं में जुड़ सकता है। दो अलग enzymes दो अलग और non-equivalent ends बनाते हैं। तब insert केवल निर्धारित matching ends के साथ एक preferred direction में लग सकता है। इसे directional cloning कहा जाता है, बशर्ते insert और vector की design सही हो। विकल्प A सही है। विकल्प B गलत है, क्योंकि enzyme को boil करने से वह denature होकर निष्क्रिय हो सकता है। विकल्प C गलत है, क्योंकि DNA हटाने से cloning ही रुक जाएगी। विकल्प D गलत है, क्योंकि जुड़े हुए DNA को स्थिर बनाने के लिए ligase आवश्यक है। यह हर प्रयोग में पूर्ण guarantee नहीं देता, लेकिन orientation control में बहुत सहायक है। याद रखें: दो अलग cuts, एक planned direction।
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