Why can ligase be added near the last step in a cloning practical?क्लोनिंग practical में लाइगेज को अंतिम चरण के पास क्यों मिलाया जा सकता है?
Answer and explanationउत्तर और व्याख्या
Correct answer:सही उत्तर: Because DNA ends are prepared first and then joinedक्योंकि पहले DNA ends तैयार किए जाते हैं और फिर उन्हें जोड़ा जाता है
A typical cloning workflow first isolates the vector and insert, then cuts them or otherwise prepares compatible DNA ends. The ends must be available and correctly aligned before the joining reaction can be performed. DNA ligase is therefore added at the ligation stage, often near the end of the in-vitro assembly sequence, to seal the compatible vector and insert ends by forming phosphodiester bonds. Option A is correct. Ligase does not cut DNA; restriction enzymes usually perform that preparation. It does not make a gel, and it is an enzyme rather than a host cell. The phrase “near the last step” refers to the order of assembly, not an absolute requirement for every protocol.क्लोनिंग की सामान्य कार्यविधि में पहले vector और insert को अलग किया जाता है तथा restriction enzyme से काटकर या अन्य विधि से उनके compatible DNA ends तैयार किए जाते हैं। Joining reaction तभी हो सकती है, जब दोनों DNA ends उपलब्ध और सही दिशा में पास-पास हों। इसलिए in-vitro assembly sequence के अंतिम भाग में DNA लाइगेज मिलाया जाता है, जो compatible ends के बीच फॉस्फोडाइएस्टर बंध बनाकर उन्हें जोड़ता है। विकल्प A सही है। DNA काटने का कार्य सामान्यतः restriction enzyme करते हैं; लाइगेज gel नहीं बनाता और स्वयं host cell भी नहीं है। “अंतिम चरण के पास” workflow का क्रम बताता है, हर protocol में अनिवार्य अंतिम स्थिति नहीं।
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